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elisa試劑盒實(shí)驗前要做好準備工作
更新時(shí)間:2021-03-27   點(diǎn)擊次數:2071次
      elisa試劑盒實(shí)驗固相載體的挑選:很多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
  包被抗體(或抗原)的挑選:將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時(shí),請求純度要好,吸附時(shí)一般請求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃18~24小時(shí)。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌效果,應留意防護。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等?,F在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗條件下進(jìn)行反響,調查其顯色反響是不是均一性,據此判明其吸附性能是不是杰出。正式實(shí)驗時(shí),應別離以陽(yáng)性對照與陰性對照操控實(shí)驗條件,待檢樣品應作一式二份,以確保實(shí)驗成果的性。
  在ELISA中,進(jìn)行各項實(shí)驗條件的挑選是很主要的,其間包含:
  有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是現在較為滿(mǎn)足的供氫體。底物效果一段時(shí)刻后,應參加強酸或強堿以停止反響。一般底物效果時(shí)刻,以10-30分鐘為宜。底物運用液必須新鮮,尤其是H2O2在臨用前參加。然后再固定其它條件或采納“方陣法”(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體別離為不一樣的稀釋度)在正式實(shí)驗體系里地滴定其作業(yè)濃度。有時(shí)本底較高,闡明有非特異性反響,可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。酶的底物及供氫體的挑選:對供氫體的挑選請求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反響,而自身無(wú)色。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它實(shí)驗條件相同時(shí),調查陽(yáng)性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量起碼的濃度。關(guān)于多數蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1~10μg/ml。ELISA試劑盒實(shí)驗酶符號抗體作業(yè)濃度的挑選:首先用直接ELISA法進(jìn)行開(kāi)始效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶符號抗體部份)。
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